RNA干扰对MDA-MB-231乳腺癌细胞株骨保护素基因表达的抑制作用

作者：张帆; 唐振宁; 杨新华; 徐琰; 范林军; 张毅; 陈莉; 周艳; 陈庆秋; 姜军

来源：中华乳腺病杂志(电子版), 2011, 5(02): 189-197.

• 乳腺肿瘤
• 骨保护素
• RNA干扰
• MDA-MB-231细胞

目的构建针对骨保护素(OPG)基因的一个载体编码三条短发夹RNA(shRNA)的真核表达质粒,观察其对MDA-MB-231乳腺癌细胞株OPG表达的抑制作用。方法选择3个针对OPG基因的RNA干扰(RNAi)位点,分别设计合成3对编码相应shRNA的DNA单链,每对单链连接形成双链后分别与线性化载体pGenesil-1.1、pGenesil-1.2、pGenesil-1.3连接形成pGenesil-1.1-shRNA1、pGenesil-1.2-shRNA2、pGenesil-1.3-shRNA3,对以上重组载体反复酶切连接,构建成重组质pGenesil-1.1-1.2-1.3-shRNA1-shRNA2-shRNA3,酶切鉴定和测序无误后,将该质粒转染MDA-MB-231细胞,以G418加压筛选,对转染细胞行单克隆化,稳定转染细胞行RT-PCR和Westernblot检测,确定其对OPG基因表达抑制作用。统计分析采用单因素方差分析和SLD分析法。结果成功构建了pGenesil-1.1-1.2-1.3-shRNA1-shRNA2-shRNA3重组质粒;以该质粒稳定转染MDA-MB-231细胞后其OPGmRNA和蛋白表达均较对照差异有统计学意义(P<0.05),RNAi对OPGmRNA和蛋白的表达抑制率分别为91%和73%。结论本研究构建了针对OPG的一个载体编码3条shRNA的真核表达质粒,通过RNAi抑制了MDA-MB-231细胞OPG基因表达,为进一步深入探讨肿瘤细胞自身OPG表达在乳腺癌骨转移发生发展中的作用提供了相关实验基础。

• 单位
  第三军医大学西南医院