携带人肝癌细胞CDK2基因的rAAV载体的构建与鉴定

作者：于水澜; 姜颖; 于英君; 宋高臣^*

来源：中国实验诊断学, 2019, 23(06): 1058-1061.

• 重组腺相关病毒(rAAV)
• 肝癌
• CDK2
• 基因治疗

目的构建携带人肝癌细胞CDK2基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体;方法设计能表达CDK2特异性的小干扰RNA(siRNA),构建pAKD-shRNA-CDK2重组质粒,采用磷酸钙共转染法将重组质粒pAKD-shRNACDK2、包装质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper共转染AAV-293细胞,采用定量PCR方法对病毒进行滴度测定;结果三质粒共转染AAV-293细胞48h后,荧光显微镜下检测到GFP绿色荧光,表明共转染成功,测定病毒平均滴度为3.56×1012v.g/ml。结论成功构建携带人肝癌细胞CDK2基因的重组腺相关病毒rAAV-shRNA-CDK2。

• 单位
  黑龙江中医药大学; 基础医学院; 牡丹江医学院