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摘要
目的构建反式自主转运蛋白的离体重组系统, 以用于深入研究反式自主转运蛋白的跨膜转运机制。方法以大肠埃希菌紧密黏附素Intimin为例, 进行离体重组系统的构建。获得Intimin的过表达菌株后, 将其制备成原生质球, 诱导Intimin表达。纯化重组表达的桶状蛋白组装复合物, 将其制备成蛋白脂质体。反应体系中加入蛋白酶K处理后, 观察转运是否成功。结果原生质球诱导表达未折叠的Intimin后, 向体系中加入桶状蛋白组装复合物制备的蛋白脂质体, 反应结束后加入蛋白酶K处理。与不加蛋白脂质体的对照组相比, 能观察到Intimin不被蛋白酶K消化, 表明Intimin被成功转运至膜上。结论反式自主转运蛋白Intimin的跨膜转运需要桶状蛋白组装复合物的参与。本研究成功建立反式自主转运蛋白的离体重组系统, 从而有助于深入研究反式自主转运蛋白的跨膜转运机制。
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单位医学分子生物学国家重点实验室; 中国医学科学院基础医学研究所; 北京协和医学院
