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摘要
目的验证pSOS-HUS筛选目的基因最佳siRNA的效果,应用pSOS-HUS筛选新基因HA117最佳siRNA,构建携带HA117基因最佳siRNA转录模板DNA的重组腺病毒。方法构建携带HA117基因及其siRNA模板DNA链的双克隆质粒。把双克隆质粒分别转染293细胞,通过镜下观察、流式细胞仪检测比较绿色荧光表达强度,RT-PCR检测HA117基因mRNA表达,筛选鉴定基因HA117最佳siRNA。构建HA117基因RNA干扰重组腺病毒。结果从5对模板DNA链中筛选出最有效片段HAi5,构建携带HAi5的重组腺病毒。结论载体pSOS-HUS可快捷有效地筛选目的基因的最佳siRNA;在5对模板DNA中,HAi5转录的siRNA对新基因HA117干扰效果最强;成功构建携带HAi5的重组腺病毒。
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单位重庆医科大学附属儿童医院
