nicastrin基因沉默的HaCaT细胞基因表达谱分析

作者：肖学敏; 何艳艳; 徐浩翔; 王宝玺^*; 林立航^*

来源：中华皮肤科杂志, 2020, 53(06): 445-451.

• 化脓性汗腺炎
• 角蛋白细胞
• 基因表达谱
• 细胞增殖
• 细胞分化
• Nicastrin基因

目的通过沉默人永生化角质形成细胞HaCaT细胞中nicastrin(NCSTN)基因的表达, 研究其下游细胞增殖及分化相关信号通路的改变。方法将HaCaT细胞分为干扰组、阴性对照组和空白对照组:干扰组转染特异性NCSTN-siRNA, 阴性对照组转染阴性对照siRNA, 空白对照组转染等量转染试剂。实时PCR及Western印迹检测各组NCSTN mRNA和蛋白表达验证转染效率。运用Agilent人类全基因组表达谱芯片技术研究干扰组HaCaT细胞基因表达谱与阴性对照组之间的差异, 以表达上调或者下调倍数≥ 2.0且P ≤ 0.05为标准, 将差异基因用GO分析进行富集, 筛选出表达差异显著且与角质形成细胞增生分化相关的基因, 用实时PCR验证结果。结果干扰组HaCaT细胞NCSTN mRNA及蛋白相对表达量分别为0.287 ± 0.090、0.443 ± 0.085, 明显低于阴性对照组(0.969 ± 0.127、1.047 ± 0.114)以及空白对照组(1.000 ± 0.151、1.000 ± 0.111), 差异均有统计学意义(F值分别为30.787、31.139, P值均为0.001)。表达谱芯片显示, 与阴性对照组相比, 干扰组表达下调基因605条, 上调基因444条。GO分析显示, 干扰后差异表达基因富集到上皮发育、上皮细胞分化、角质形成细胞分化、角化4种生物学过程。对表达差异显著且与角质形成细胞增生分化相关的Sprouty相关蛋白2基因、表皮生长因子7基因、胰岛素样生长因子结合蛋白5基因、人Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶2基因和骨形成发生蛋白6基因通过实时PCR验证, 验证结果与芯片结果显示的差异趋势一致。结论 NCSTN基因功能缺失有可能通过调节其下游细胞增殖及分化相关信号通路的表达, 影响角质形成细胞的正常增殖和分化。

• 单位
  福建医科大学附属协和医院; 北京协和医学院; 中国医学科学院