荧光定量PCR检测2型猪圆环病毒方法的建立

作者：敖艳华; 穆光慧; 郭沈涛; 齐冬梅; 张毓金

来源：广东畜牧兽医科技, 2014, 39(01): 28-31.

• 猪圆环病毒
• 荧光定量PCR
• TaqMan探针

通过克隆2型猪圆环病毒(PCV2)的开放阅读框2(ORF2)基因编码其核衣壳蛋白(Cap)的一段靶序列,构建重组质粒作为标准阳性模板。根据GenBank中的靶序列设计一对引物和一条TaqMan探针。对PCR反应条件优化后,对构建的标准阳性模板定量,然后10×倍比稀释进行荧光定量PCR(qPCR)扩增并制作标准曲线,初步建立了PCV2检测的qPCR方法。结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0×102拷贝/μL,线性范围为101109,达9个数量级,并且具有很好的特异性。对起始浓度为1.0×108、1.0×106、1.0×104拷贝/μL的标准品的最终实际测得CT均值分别为12.77、19.72和26.89;变异系数分别为0.25%、0.10%和0.13%,均小于1%,说明此方法具有良好的准确性和重复性。

• 单位
  广东永顺生物制药股份有限公司