miR-122靶向调控RhoA基因影响乙型肝炎病毒复制与表达的机制研究

作者：马红; 李莉; 周丽君

来源：国际检验医学杂志, 2023, 44(06): 677-682.

• 乙型肝炎病毒
• RhoA
• miR-122
• HepG2.2.15细胞

目的 探讨miR-122通过调控小G蛋白超家族成员RhoA基因对隐匿性乙型肝炎病毒(HBV)复制与表达的影响及其作用机制。方法 实时荧光定量PCR测定HBV(+)与HBV(-)的肝癌患者组织、HepG2细胞与HepG2.2.15细胞中miR-122表达差异，实时荧光定量PCR和Western Blot检测HBV(+)与HBV(-)的肝癌患者组织、HepG2细胞与HepG2.2.15细胞中RhoA mRNA和RhoA蛋白的表达差异；按照实验分组将pEGFP-C1-miR-122与pcDNA3.0-V14RhoA转染至HepG2.2.15细胞，实时荧光定量PCR测定miR-122与RhoA mRNA表达，Western Blot检测RhoA蛋白表达；生物信息学方法预测miR-122与RhoA基因的靶向结合位点，构建野生型RhoA 3′非翻译区(3′UTR)和突变型RhoA 3′UTR双荧光素酶表达载体，检测细胞荧光素酶活性变化；酶联免疫吸附试验测定细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)与乙型肝炎e抗原(HBeAg)水平，实时荧光定量PCR检测细胞培养上清液中HBV DNA水平，Western Blot检测细胞内Rho相关蛋白激酶(ROCK)-1与ROCK-2相对表达水平。结果 相较于HBV(-)肝癌患者组织，HBV(+)肝癌患者组织中miR-122表达下调，RhoA mRNA和RhoA蛋白相对表达水平上调(P<0.05);与HepG2细胞比较，HepG2.2.15细胞中miR-122表达也下调，RhoA mRNA和RhoA蛋白相对表达水平上调(P<0.05)。经预测发现RhoA mRNA 3′UTR与miR-122在特定区域存在碱基互补现象，miR-122 mimic和RhoA 3′UTR WT重组质粒共转染的细胞中相对荧光素酶活性降低(P<0.05)。此外，过表达miR-122的HepG2.2.15细胞中RhoA mRNA和RhoA蛋白相对表达水平下调(P<0.05)。与空白组比较，miR-122组HepG2.2.15细胞培养上清液HBsAg与HBeAg水平均降低，HBV DNA表达降低，ROCK-1与ROCK-2表达均上调(P<0.05);而V14RhoA组HBsAg与HBeAg水平则高于空白组，HBV DNA表达升高，ROCK-1与ROCK-2表达均上调(P<0.05)。结论 miRNA-122可通过下调RhoA基因表达抑制HBV的复制和表达，其机制可能与抑制Rho/ROCK信号通路激活有关。

• 单位
  乌鲁木齐市中医医院