牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒双重荧光定量 PCR检测方法的建立

作者：谢志勤; 谢芝勋; 范晴; 张民秀; 罗思思; 张艳芳; 曾婷婷; 黄娇玲; 王盛; 谢丽基; 邓显文; 刘加波; 庞耀珊

来源：动物医学进展, 2019, 40(3): 20-25.

DOI：10.3969/j.issn.1007-5038.2019.03.004

• 牛传染性鼻气管炎病毒
• 牛病毒性腹泻病毒
• 双重荧光定量PCR
• TaqMan探针
• 检测

为建立基于Taq Man探针的双重荧光PCR技术检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法,根据IBRV gB基因序列和BVDV 5′端非编码区序列的保守区域,分别设计1对IBRV的特异性引物和1条FAM标记的Taq Man探针,1对BVDV的特异性引物和1条ROX标记的Taq Man探针,建立双重荧光定量PCR检测IBRV和BVDV的方法.对建立的检测方法进行特异性和敏感性测定,并用临床样品进行检测验证.特异性试验结果显示,该方法检测参试的IBRV毒株,在波长530μm(FAM)时收集到特异性荧光信号曲线,检测参试的BVDV毒株,在610μm(ROX)时收集到特异性荧光信号曲线,无交叉信号出现,对照的毒株无论是在530μm(FAM),还是610μm(ROX)处,均无荧光信号曲线出现,方法的特异性好;敏感性试验结果显示,该双重荧光定量PCR可检测到100个拷贝的IBRV和BVDV质粒DNA模板;临床样品检测结果表明,对保存在-70℃的127份牛病料样品核酸进行检测,IBRV阳性12份,BVDV阳性26份,IBRV和BVDV同为阳性2份,为混合感染,检测的拷贝数分别为6.24×105和6.32×104拷贝/μL.阳性样品经序列比对分析,分别与IBRV和BVDV的序列100％同源.建立的双重实时荧光定量PCR方法检测IBRV和BVDV具有特异、敏感等优点,可用于临床样品的鉴别检测.

• 单位
  广西壮族自治区兽医研究所