枸杞多糖通过MGL/TLR通路调控巨噬细胞RAW264.7的活化

作者：刘亚楠; 杨皓凯; 闫亚娟; 杨小娟; 段相国; 苏春霞

来源：中国实验方剂学杂志, 2022, 1-7.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20222104

• 枸杞多糖
• 巨噬细胞RAW264.7
• Toll样受体2（TLR2）
• Toll样受体4（TLR4）
• 丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）
• 巨噬细胞半乳糖型凝集素（MGL）

目的：探讨枸杞多糖（LBP）促进巨噬细胞RAW264.7活化的机制。方法：采用不同浓度(50、100、200 mg·L-1)的LBP刺激巨噬细胞RAW264.7，以100 μg·L-1的脂多糖（LPS）和100 mg·L-1 半乳糖（Gal）作为阳性对照。LBP刺激24 h后，采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）检测不同给药浓度的LBP(0、50、100、200、400、800mg· L-1)对巨噬细胞RAW264.7的毒性影响；采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞培养上清中白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-12（IL-12）的水平；分别通过实时荧光定量聚合酶链式反应（TaqMan-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测巨噬细胞RAW264.7 Toll样受体4（TLR4）/Toll样受体2（TLR2）/巨噬细胞半乳糖型凝集素（MGL）通路中p38丝裂原活化蛋白激酶、细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶（p38/ERK/Jnk MAPK）和核转录因子-κB（NF-κB）mRNA以及蛋白表达水平；结果：CCK-8结果显示，与空白组比较，400和800 mg·L-1 LBP组干预巨噬细胞RAW264.7时，细胞存活率下降（P＜0.05）。ELISA结果显示，与空白组比较，50 mg·L-1 LBP能够促进巨噬细胞RAW264.7分泌IL-12水平（P＜0.01）；与空白组比较，100 mg·L-1 LBP、200 mg·L-1 LBP能够促进巨噬细胞RAW264.7分泌IL-6水平（P＜0.05，P＜0.01）。Western blot结果显示，与空白组比较，不同质量浓度的LBP组(50、100、200 mg·L-1)作用于巨噬细胞RAW264.7能够增强TLR4、TLR2和MGL通路中MAPK关键分子（p-p38、p-ERK、p-NFκB、p-JNK）的蛋白表达水平（P ＜0.05，P ＜0.01）；与模型组比较，200 mg·L-1 LBP组能够促进巨噬细胞RAW264.7 p-NF-κB蛋白表达水平（P＜0.01）。TaqMan-PCR结果显示，与空白组比较，不同质量浓度的LBP组(50、100、200 mg·L-1)作用于巨噬细胞RAW264.7能够增强TLR4、TLR2通路中MAPK关键分子（p38、ERK、NFκB、JNK）的mRNA表达水平（P ＜0.05，P ＜0.01）；与模型组比较，50、200 mg·L-1 LBP组能够促进巨噬细胞RAW264.7 JNK、ERK2mRNA的表达水平（P ＜0.05，P ＜0.01）。结论：LBP能够通过TLR2/TLR4//MGL通路调控巨噬细胞RAW 264.7的活化，参与免疫应答。

• 单位
  基础医学院; 宁夏医科大学