低氧上调甲基转移酶RNA结合蛋白15通过AGAP2-AS1促乳腺癌侵袭的机制

作者：钱学珂^*; 王彦艳; 张晓菲; 邓光

来源：中华实验外科杂志, 2023, 40(07).

• 低氧
• 乳腺癌
• m6A甲基化

目的探索低氧诱导乳腺癌细胞RNA结合蛋白15(RBM15)表达上调促进癌侵袭的作用及机制。方法分析基因型-组织表达(GTEx)和癌症基因图谱(TCGA)数据库中乳腺癌组织甲基转移酶RBM15和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达水平及患者预后。使用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot比较常氧(20%O2)和低氧(1%O2)培养乳腺癌细胞MCF7、MDA-MB-231、BT20和HCC1143的RBM15、AGAP2反义RNA 1(AGAP2-AS1)表达, 采用甲基化转录组RNA免疫共沉淀结合qPCR(MeRIP-qPCR)检测AGAP2-AS1的RNA甲基化修饰;采用Transwell实验检测细胞侵袭能力。后用小干扰RNA(siRNA)或质粒敲低或过表达RBM15, 在敲低RBM15的细胞中同时过表达AGAP2-AS1, 检测AGAP2-AS1甲基化修饰水平和表达水平变化, 采用Transwell检测各组细胞侵袭能力变化。两样本间的比较采用t检验。结果 GTEx和TCGA数据库乳腺癌组织RBM15呈过表达(P<0.05), 且与不良预后——无病生存期(DFS)降低相关[风险比(HR)=0.91], RBM15和HIF-1α的表达水平呈正相关(R=0.3)。低氧组MCF7、MDA-MB-231、BT20和HCC1143细胞中RBM15的mRNA和蛋白表达水平均高于对应常氧组细胞(t=3.042、7.103、4.977、3.227, P<0.05), 低氧组AGAP2-AS1的表达水平均升高(t=9.830、3.497、22.780、7.140, P<0.05);低氧组BT20细胞AGAP2-AS1的m6A甲基化修饰水平升高(t=10.460, P<0.05)。低氧培养促进了MDA-MB-231、BT20细胞的侵袭, 敲低MDA-MB-231、BT20细胞RBM15表达后细胞侵袭能力下降, 在敲低RBM15的BT20细胞中同时过表达AGAP2-AS1后细胞侵袭能力恢复。在低氧培养的BT20细胞中敲低RBM15表达后AGAP2-AS1的m6A甲基化修饰水平(si-RBM15#1组t=6.815, si-RBM15#2组t=34.350)和表达水平(si-RBM15#1组t=16.660, si-RBM15#2组t=7.323)均显著下调(P<0.05)。在常氧培养的BT20细胞中过表达RBM15后AGAP2-AS1甲基化水平(Lv-RBM15#1组t=16.270, Lv-RBM15#2组t=9.340)和表达水平(Lv-RBM15#1组t=14.040, Lv-RBM15#2组t=9.949)均上调(P<0.05)。结论乳腺癌的低氧压力诱导RBM15上调, 通过调控AGAP2-AS1的m6A甲基化修饰和表达水平, 促进细胞侵袭。

• 单位
  郑州大学第一附属医院