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摘要
电子克隆(in silico cloning)是随着基因组计划和EST计划实施而发展起来的利用生物信息学手段进行基因克隆的新方法。本研究根据物种间同源基因相对保守的特点,利用生物信息学方法以不同物种的基因序列为信息探针,运用Blast软件与所下载的大豆EST数据库进行比对拼接,获得基因全长cDNA序列。首次克隆了大豆天冬氨酸代谢途径上AHRI、AHAS、ASADH、BCAT、CBL、DAPD、DAPE、DHDPR、DHAD、HK和TD等11个关键酶基因的cDNA序列。其中AHRI、DAPD、DAPE、DHDPR和DHAD基因经RT-PCR克隆和序列分析验证,长度分别为1764bp、1467bp、1080bp、1035bp和1806bp,结果与电子克隆序列基本一致。本实验通过与不同物种的这些基因蛋白序列比较,发现与双子叶植物拟南芥、蓖麻和马铃薯的同源性较高,而与单子叶植物水稻的同源性略低。
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