猪流行性腹泻病毒YJH141分离株感染性克隆的构建及鉴定

作者：郑伟康; 张静苗; 刘雅琦; 周莹珊; 杜静; 宋厚辉; 董婉玉^*; 王晓杜^*

来源：中国兽医学报, 2023, 43(09): 1800-1813.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2023.09.02

• 猪流行性腹泻病毒
• 感染性克隆
• 拯救

为构建猪流行性腹泻病毒(PEDV) YJH141毒株的感染性克隆，本研究将该病毒全长基因组分为8段进行扩增，在病毒全长基因组的11 467与11 476位核苷酸处引入同义突变，构建SfiⅠ酶切位点作为遗传标记位点。以病毒基因组RNA为模板通过RT-PCR分别扩增各片段，随后将各片段分别构建至T载体中作为亚克隆质粒。各亚克隆质粒经测序鉴定正确后，分段连接至pBAC载体中构建YJH141全长cDNA克隆质粒，通过PCR及测序验证显示全长感染性克隆质粒构建成功，将其命名为pBAC-PEDV-YJH141。将鉴定正确的pBAC-PEDV-YJH141转染至293T细胞，转染后24 h收取上清接种于Vero细胞并传代。通过观察细胞病变(CPE)、RT-PCR检测、Western blot检测及测序验证重组病毒的遗传标记位点共同验证重组病毒拯救成功，将其命名为rYJH141。通过空斑试验、间接免疫荧光试验(IFA)和病毒生长曲线探究重组病毒与亲本病毒的生长特性，结果表明YJH141及rYJH141具有相似的生长特性。本研究为探究PEDV复制及致病机制的研究提供了技术平台，同时为疫苗的研发奠定了基础。

• 单位
  浙江农林大学; 动物科技学院