YAP1在发情期不同繁殖力湖羊子宫内膜中的表达模式及功能分析

作者：王雅涵; 郑宇婧; 钟沛; 李晓丹; 王锋^*

来源：畜牧兽医学报, 2023, 54(01): 189-200.

• 湖羊
• Hippo通路
• YAP1
• 子宫容受性

旨在分析Hippo信号通路的效应基因YAP1在不同繁殖力湖羊子宫内膜中的表达模式及功能。本研究根据系谱档案和BMPR-1B基因多态性分析，将9只体况相近且健康的经产母羊分为3组(HBB、LBB以及LB+,n=3)。提取不同繁殖力湖羊子宫内膜组织RNA,并反转录为cDNA,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)分析Hippo信号通路中几个主效基因的表达模式。运用生物信息学方法分析YAP1在不同物种间的氨基酸同源性及其亲缘关系。体外分离湖羊子宫内膜基质细胞，利用RNA干扰和细胞转染技术体外干扰YAP1,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)分析YAP1基因对子宫容受性相关基因的影响。利用流式细胞术分析干扰YAP1对细胞凋亡的影响，同时利用RT-qPCR和Western blot检测干扰YAP1后凋亡及线粒体相关基因的表达。结果显示，Hippo信号通路中YAP1、LATS1、MST1基因在不同繁殖力湖羊子宫内膜组织中的表达水平存在差异，其中YAP1基因在高繁殖力(HBB)湖羊子宫内膜中的表达量显著高于两组低繁殖力(LB+、LBB)湖羊；氨基酸同源性及系统进化树分析显示，绵羊YAP1蛋白与山羊和牛的同源性最高，亲缘关系最近；干扰YAP1基因后，子宫内膜基质细胞中容受性相关基因(FOXO1、PRL、VEGF、OPN、COX-2)的mRNA表达水平均发生了显著的变化。同时，子宫内膜基质细胞的凋亡率显著升高，凋亡相关基因Bax、BIM、p53、caspase3、caspase8、caspase9表达水平及Bax/Bcl-2的比值显著升高，Bcl-2表达水平显著下调。此外，线粒体功能相关基因(FIS1、DNM1L、MFN2、PPARGC1A、OPA1)mRNA表达水平也发生了显著变化。YAP1可能通过抑制细胞凋亡和稳定线粒体功能等途径建立良好的子宫内膜容受性。

• 单位
  动物科技学院; 南京农业大学