真核表达质粒PIRESneo3/miR-194的构建及其在乳腺癌细胞MCF-7中的表达

作者：李佳; 王本忠

来源：安徽医科大学学报, 2012, (07): 772-776.

DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2012.07.005

• miRNA
• 转染
• 乳腺癌
• 质粒 miRNA
• transfection
• breast cancer
• plasmid

目的构建含miR-194基因的真核表达质粒,建立miR-194稳定表达的MCF-7乳腺癌细胞株。方法设计合成miR-194引物序列,PCR法从乳腺癌231细胞中扩增出目的片段,经双酶切后定向连入PIRESneo3载体,构建PIRES-neo3/miR-194真核表达质粒,经酶切、测序检测其构建的正确性。脂质体法将重组质粒转入MCF-7细胞,G418药物筛选出稳定转染的细胞,实时荧光定量PCR法检测稳定转染MCF-7细胞中miR-194基因的表达水平。结果构建的PIRESneo3/miR-194质粒经酶切、测序等检验表明质粒构建成功,筛选获得稳定高表达miR-194的MCF-7乳腺癌细胞株。结论...

• 单位
  安徽医科大学第一附属医院