HCV NS4B表达载体的构建及其对细胞凋亡的影响

作者：宋彬妤; 赵嘉伟; 宋静; 陈思思; 胡志廷; 韩昕; 王敏敏; 任来峰

来源：中国现代医学杂志, 2017, 27(26): 25-29.

• 丙型肝炎病毒
• 非结构蛋白4B
• 重组质粒
• 凋亡

目的构建丙型肝炎病毒(HCV)2a型非结构蛋白4B(NS4B)的真核表达载体,并观察其对骨肉瘤细胞U2OS凋亡的影响。方法以质粒PJFH1为模板,通过PCR反应扩增NS4B目的基因片段,采用同源重组法与PCMV-tag2b载体相连,转化大肠杆菌感受态DH5α,筛选正确的克隆。以脂质体为介导转染U2OS细胞,通过Western blot检测NS4B蛋白的表达,免疫荧光检测细胞的凋亡。结果构建p CMV-tag2b-NS4B重组质粒,经测序其与NCBI公布的序列完全一致,并可在U2OS细胞中表达,DAPI检测显示细胞凋亡率为(17.25±2.95)%,对照组凋亡率为(6.53±2.36)%。结论成功构建NS4B的真核表达载体,并可在U2OS细胞中表达,诱导细胞凋亡。

• 单位
  山西医科大学汾阳学院; 厦门大学