肺炎克雷伯菌调控肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬的机制研究

作者：师志云; **; 马苗; 李刚; 李莎莎; 王文; 赵梅; 陶佳; 赵志军; 贾伟^*

来源：中华医院感染学杂志, 2019, 29(11): 1601-1608.

• 肺炎克雷伯菌
• 肺泡Ⅱ型上皮细胞
• 自噬
• 机制

目的探讨肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬体与肺炎克雷伯菌相互作用的分子机制。方法建立体外肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)感染A549细胞模型,分为感染组(Pneu)、自噬抑制组(Pneu+3-MA)、自噬诱导组(Pneu+rapa)、阴性对照组(ctrl),每组3个样本;通过免疫荧光染色与western-blot实验检测肺炎克雷伯菌不同时间点及不同浓度感染后细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ的表达变化及分布情况;进一步采用自噬抑制剂3-Methyladenine (3-MA)与激动剂雷帕霉素(Rapamycin)干预细胞,观察K.pneumoniae感染A549细胞后自噬水平的变化。结果与未感染肺炎克雷伯菌的对照组相比,共聚焦显微镜观察感染组细胞LC3自噬体发生明显改变(P<0.05),western-blot检测感染组细胞LC3Ⅱ蛋白表达上升(P<0.05),且LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ升高(P<0.05),表明肺炎克雷伯菌能够促进细胞自噬,随着细菌感染细胞比例(MOI)的增大,细胞自噬随之增多,随着时间的延长,肺炎克雷伯菌对细胞的入侵能力减弱(自噬增加),LC3Ⅱ蛋白的表达逐渐增加。自噬抑制剂和激动剂处理细胞后,免疫荧光和western-blot检测结果显示,感染组、自噬诱导组的LC3Ⅱ蛋白高于对照组(P<0.05),采用3-MA处理的感染组LC3Ⅱ蛋白低于感染组(P<0.05),表明3-MA能够抑制细胞的自噬,Rapamycin可以促进细胞的自噬。结论自噬在肺泡Ⅱ型上皮细胞抵抗肺炎克雷伯菌过程中发挥着非常重要的作用。

• 单位
  宁夏临床病原微生物重点实验室; 宁夏医科大学; 宁夏医科大学总医院