PEG定点修饰重组人睫状神经营养因子及其生物活性评价

作者：冯翠; 王祺; 张纯; 秦培勇; 郑秀玉; 王健; 刘永东; 苏志国

来源：中国生物工程杂志, 2015, 35(05): 15-21.

DOI：10.13523/j.cb.20150503

• 马来酰亚胺聚乙二醇
• CNTF-C12单修饰物
• 重组人睫状神经营养因子
• 分离纯化

采用分子质量为40k Da的马来酰亚胺聚乙二醇(m PEG-MAL),对重组人睫状神经营养因子突变体CNTF-C17的第17位半胱氨酸巯基进行定点修饰,通过离子交换层析获得单修饰产物Mono-PEG-CNTF-C17,并对其结构及体内外活性进行评价。实验结果表明,在p H 7.5的Tris-HCl缓冲液体中,蛋白质与修饰剂的为1∶3,4℃下反应12h,修饰率可达到90%以上,修饰混合物通过一步阴离子交换层析可获得纯度98%以上的单修饰产物。荧光光谱(FL)及圆二色(CD)图谱显示Mono-PEG-CNTF-C17与原蛋白二、三级结构一致。TF-1.CN5a.1细胞增殖活性检测表明,MonoPEG-CNTF-C17的比活达到了6.51×105IU/mg,体内循环半衰期相对原蛋白显著提高了30.3倍。该研究可为开发CNTF长效产品提供基础。

• 单位
  生化工程国家重点实验室; 北京化工大学; 中国科学院过程工程研究所