前蛋白转换酶枯草溶菌素9纳米疫苗的构建与细胞吞噬效率的体外实验研究

作者：季海英; 何斌; 石学银^*

来源：国际麻醉学与复苏杂志, 2020, 41(03): 225-229.

• 前蛋白转换酶枯草溶菌素9
• 纳米疫苗
• 树突状细胞
• 吞噬

目的制备前蛋白转换酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9, PCSK9)纳米疫苗, 并初步探讨树突状细胞(dendritic cells, DC 2.4)对纳米疫苗的体外吞噬效率。方法选取PCSK9207-223为抗原肽, 牛血清白蛋白(bovine se-rum albumin, BSA)为载体蛋白, 用"还原-热聚-氧化"法将BSA分子转变为BSA纳米颗粒(BSA nanoparticle, BN), PCSK9多肽链接在BN表面合成纳米疫苗(BSA-PCSK9 nanoparticle, BPN), PCSK9多肽与分子BSA直接链接合成分子疫苗(BSA-PCSK9, BP)。动态光散射测定BN、BPN粒径和电位大小, 透射电子显微镜观察形貌;SDS-PAGE电泳分析抗原负载情况;检测BPN不同时间点的粒径变化反映其在生理环境下的稳定性;BPN与DC 2.4细胞共孵育24 h, 增强型细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8, CCK8)检测DC2.4细胞活性, 反映BPN生物相容性;流式细胞仪检测DC 2.4对纳米疫苗的吞噬情况。结果合成的BPN粒径为(68.2± 3.1)nm、电位为(?14.8±0.6)mV, 透射电子显微镜观察显示BPN近球形;SDS-PAGE电泳结果显示BPN相对分子质量增加, 证明短肽链接成功;模拟生理环境下, BPN粒径在144 h内保持稳定;增强型CCK8检测结果显示DC2.4细胞活性均大于100%;流式细胞仪检测结果显示, 相比BP, DC 2.4对BPN的吞噬效率更高。结论 BPN体外稳定性及生物相容性好, 易于被DC吞噬。

• 单位
  上海交通大学医学院附属新华医院