佛波酯诱导C2C12肌管自噬及corylifol A的保护作用研究

作者：邝计霞; 沈强; 刘璇^*

来源：上海中医药大学学报, 2022, 36(02): 49-58.

DOI：10.16306/j.1008-861x.2022.02.009

• 佛波酯
• 次苷酸查尔酮
• 自噬
• C2C12肌管

目的：探索佛波酯（PMA）诱导C2C12肌管自噬的作用机制并考察补骨脂成分次苷酸查尔酮（CYA）对肌管的保护作用。方法：构建能够准确分析细胞自噬状态的mRFP-GFP-LC3B双荧光C2C12成肌细胞，将已分化C2C12细胞分为对照组、PMA组（1μmol/L）、自噬阳性对照组（饥饿组）、CYA组（10μmol/L）及PMA+CYA组。处理时间为48 h。Cytation 5测定细胞在不同波长下的荧光强度，Western blot检测自噬相关蛋白Beclin-1及微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)的表达水平，qPCR技术检测蛋白激酶C(PKC)-ε、PKC-β,PKC-θ和缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)的表达水平。用海马能量代谢分析仪（Seahorse XFe 24分析仪）检测细胞线粒体呼吸能力。结果：(1)与对照组比较，PMA(1μmol/L)可使C2C12肌管的黄色荧光斑点显著增加，红色荧光信号强度也显著增强（P<0.01），即自噬及自噬溶酶体均增加。而CYA(10μmol/L)可以显著降低PMA诱导的C2C12肌管黄色荧光斑点和红色荧光信号强度（P<0.01）。(2)与对照组比较，PMA可以上调Beclin-1和LC3BⅡ蛋白表达水平（P<0.05,P<0.01）；与PMA组比较，PMA+CYA组可以降低自噬相关蛋白Beclin-1及LC3BⅡ的蛋白表达水平（P<0.05,P<0.01）。(3)与对照组比较，PMA显著降低C2C12肌管的基础呼吸、最大呼吸和ATP的生成（P<0.01）。(4)与对照组比较，PMA组可以显著上调PKC-ε、PKC-β、PKC-θ和HIF-2α基因表达水平（P<0.05,P<0.01）。结论：PMA可能通过激活C2C12肌管的PKC通路来抑制细胞线粒体呼吸，促进HIF-2α的表达，HIF-2α上调自噬相关蛋白Beclin-1和LC3BⅡ的表达，从而诱导C2C12肌管自噬。CYA则可能通过下调Beclin-1和LC3BⅡ的蛋白表达来保护肌管对抗PMA诱导的自噬。

• 单位
  上海中医药大学