热休克蛋白HSP90B1影响牛病毒性腹泻病毒复制的研究

作者：陈俊贞; 权冉; 付强; 葛丽娟; 袁圆圆; 张成远; 李建林; 史慧君^*

来源：畜牧兽医学报, 2023, 54(02): 683-693.

• 热休克蛋白
• 牛病毒性腹泻病毒
• CRISPR/Cas9
• 复制

旨在探究热休克蛋白90 β家族成员1(heat shock protein 90 beta family member 1,HSP90B1)对牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)复制的影响。本研究通过实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR)和Western blot检测BVDV感染MDBK细胞后HSP90B1 mRNA和蛋白的表达情况，利用CRISPR/Cas9技术构建HSP90B1 KO细胞，计数检测敲除HSP90B1对细胞生长的影响，BVDV TC株感染HSP90B1 KO和对照组Scramble细胞后，使用qRT-PCR、免疫荧光、病毒滴度以及细胞病变效应(cytopathic effects, CPE)检测BVDV的复制情况。结果表明，qRT-PCR检测显示BVDV感染24 h时与空白组相比HSP90B1 mRNA转录水平显著升高(P<0.05),36 h后极显著升高(P<0.01),同时Western blot显示BVDV感染组HSP90B1蛋白的表达水平较未感染组明显增加；Western blot检测显示，与MDBK细胞相比HSP90B1 KO细胞中的HSP90B1蛋白表达量明显降低；细胞计数显示，相同生长时间的Scramble、HSP90B1 KO细胞与MDBK细胞的数量未见差异；qRT-PCR结果显示，与对照组相比，HSP90B1 KO细胞中BVDV 5′UTR RNA水平在BVDV感染12 h后显著降低(P<0.05),36 h后极显著降低(P<0.01);免疫荧光检测结果显示，与对照组相比，HSP90B1 KO细胞中的绿色荧光明显减少；BVDV感染后病毒滴度与对照组相比，12 h后HSP90B1 KO的病毒滴度显著降低(P<0.05),36 h后极显著降低(P<0.01),CPE显示，在感染12 h后对照组细胞出现明显CPE,而HSP90B1 KO细胞仅显示出少量CPE,感染36 h后HSP90B1 KO细胞出现明显CPE,此时对照组细胞出现大量CPE并有细胞脱落。以上结果表明BVDV诱导MDBK细胞中HSP90B1的表达；利用CRISPR/Cas9技术成功敲除MDBK细胞的HSP90B1基因，构建HSP90B1 KO细胞，试验表明敲除HSP90B1能够抑制BVDV的复制。

• 单位
  新疆农业大学