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摘要
目的探讨细胞黏附分子CHL1在高糖高脂诱导的胰岛素抵抗细胞和小鼠模型中的作用及其机制。方法将前脂肪细胞系3T3-L1通过完全随机法分为对照组和CHL1过表达组, 分别转染空载体和CHL1过表达载体, 随后通过胰岛素诱导分化为成熟脂肪细胞, 再通过高糖高脂诱导胰岛素抵抗。葡萄糖消耗实验检测成熟脂肪细胞胰岛素抵抗效应。Western blot法检测两组细胞CHL1和葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的表达水平以及丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)磷酸化水平, 实时定量PCR(RT-PCR)法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-6的 mRNA表达水平。然后, 选取6～8周龄的C57BL/6雄性小鼠24只, 体重20～25 g, 通过完全随机法分为常规饲料组(常规组)、高脂饲料组(高脂组)、过表达对照+高脂组和CHL1过表达+高脂组, 每组6只。通过高脂饲料饲喂小鼠构建胰岛素抵抗小鼠模型, 通过尾静脉注射慢病毒过表达CHL1。各组小鼠饲养4个月后称重, 然后处死收集附睾白色脂肪并称重, 苏木素-伊红染色观察小鼠附睾白色脂肪病理情况, 免疫组织化学染色观察其CHL1表达情况, RT-PCR法检测小鼠附睾白色脂肪组织中CHL1、TNF-α、IL-6 mRNA的表达水平。结果 (1)细胞实验结果:Western blot结果示CHL1过表达组细胞中CHL1蛋白表达高于对照组(P<0.01);葡萄糖消耗实验结果示, CHL1过表达组细胞葡萄糖剩余量低于对照组(P<0.05);RT-qPCR结果示, CHL1过表达组细胞TNF-α和IL-6 mRNA表达水平均低于对照组(P均<0.01);Western blot结果示, CHL1过表达组细胞GLUT4和p-AKT/AKT蛋白表达均高于对照组(P均<0.01)。(2)动物实验结果:饲养4个月后高脂组和过表达对照+高脂组小鼠体重和附睾白色脂肪质量均高于常规组(P均<0.01), CHL1过表达+高脂组则均低于过表达对照+高脂组(P均<0.01);苏木素-伊红染色结果示, 高脂组和过表达对照+高脂组小鼠附睾白色脂肪细胞体积大于常规组, CHL1过表达+高脂组则小于过表达对照+高脂组(P均<0.01);RT-qPCR结果示, 高脂组和过表达对照+高脂组小鼠附睾白色脂肪组织中IL-6和TNF-α mRNA表达水平均高于常规组(P均<0.01), CHL1过表达+高脂组则均低于过表达对照+高脂组(P均<0.05);免疫组织化学染色半定量结果示, 高脂组和过表达对照+高脂组小鼠附睾白色脂肪组织中CHL1蛋白表达水平均低于常规组(以常规组的表达量为1, 高脂组、过表达对照+高脂组的表达量分别为0.344、0.427), CHL1过表达+高脂组(表达量1.465)则高于过表达对照+高脂组;RT-qPCR结果示, 高脂组和过表达对照+高脂组小鼠附睾白色脂肪组织中CHL1 mRNA表达水平均低于常规组(P均<0.01), CHL1过表达+高脂组则高于过表达对照+高脂组(P<0.01)。结论 CHL1可改善高糖高脂诱导的细胞和小鼠模型的胰岛素抵抗, 其机制可能与抑制AKT激活和相关炎症反应有关。
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