石斛碱通过miR-499-5p调控糖尿病肾病系膜细胞增殖、上皮间质转化和纤维化

作者：陈玉凤^*; 孔亚坤; 李江雁; 毛小芳; 周艳红

来源：中国临床药理学杂志, 2023, 39(02): 211-215.

DOI：10.13699/j.cnki.1001-6821.2023.02.013

• 石斛碱
• 微小RNA-499-5p
• 糖尿病肾病
• 肾小球系膜细胞
• 细胞增殖
• 上皮间质转化
• 纤维化

目的 探讨石斛碱(Den)对高糖致人肾小球系膜细胞(HGMCs)增殖、上皮间质转化(EMT)和纤维化的影响及其机制。方法 将体外培养的HGMCs分为正常组、模型组和低、中、高剂量实验组。正常组以DMEM培养基培养，模型组以高糖DMEM培养基培养，低、中、高剂量实验组分别以含0.05、0.50、5.00μg·mL-1 Den的高糖DMEM培养基培养；将anti-miR-NC、anti-miR-499-5p分别转染至高剂量实验组细胞，标记为高剂量实验组+anti-miR-NC组、高剂量实验组+anti-miR-499-5p组。以细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖率；以实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中miR-499-5p表达情况；以蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞中EMT、纤维化和核因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白的表达情况。结果 正常组、模型组、低、中、高剂量实验组细胞中miR-499-5p表达水平分别为1.00±0.08,0.32±0.06,0.47±0.04,0.59±0.08和0.81±0.05,正常组与模型组比较，低、中、高剂量实验组与模型组比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。正常组、模型组、高剂量实验组、高剂量实验组+anti-miR-NC组、高剂量实验组+anti-miR-499-5p组细胞增殖率分别为(100.00±6.85)%,(159.02±10.60)%,(118.41±10.63)%、(119.30±6.88)%和(149.46±14.20)%;细胞中上皮性钙黏附素(E-cadherin)蛋白表达水分别为0.96±0.06,0.35±0.03,0.86±0.05,0.84±0.04和0.43±0.06;I型胶原酶(Col-1)蛋白表达水平分别为0.28±0.03,0.94±0.11,0.33±0.02,0.38±0.04和0.78±0.10;NF-κB蛋白表达水平分别为0.37±0.03,1.18±0.10,0.53±0.04、0.50±0.05和0.91±0.08。上述指标，模型组与正常组比较，高剂量实验组与模型组比较，高剂量实验组+anti-miR-499-5p组与高剂量实验组+anti-miR-NC组比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 Den可通过上调miR-499-5p表达改善糖尿病肾病系膜细胞增殖、EMT和纤维化，其作用机制可能与抑制NF-κB通路活化有关。

• 单位
  新乡市中心医院; 新乡医学院