流式细胞术检测精子DNA损伤的标准化与质量控制初步研究

作者：陆金春^*; 吴振波; 唐山山; 徐院花; 刘园园

来源：中华男科学杂志, 2021, 27(02): 124-128.

DOI：10.13263/j.cnki.nja.2021.02.004

• 精子DNA损伤
• DNA碎片指数
• 流式细胞术
• 标准化
• 质量控制

目的:对流式细胞术检测精子DNA损伤的标准化和质量控制进行初步研究。方法:随机选取精液样本,观察酸变性时间,吖啶橙(AO)染色时间,精液样本冷藏、冷冻及反复冻融对精子DNA碎片指数(DFI)结果的影响。结果:随着酸变性时间延长,精子DFI逐渐增高,与酸变性30 s相比,酸变性至2 min时DFI即显著增加(P <0.05)。AO染色5、20、40、60、100、140 min后的精子DFI结果没有显著差异。精液样本于2～8℃冷藏后,精子DFI随冷藏时间延长显著增加,冷藏2 d后精子DFI即明显增加。精液样本可以直接于-20℃冷冻保存,且反复冻融3次对精子DFI结果影响不大,但DFI检测结果不够稳定。精液样本分装后冷冻,间隔1 d检测1次,共1个月,以此数据模拟室内质控,所得CV值为7.13%。结论:DFI检测中,确保酸变性时间的准确非常重要,最长不能超过1 min。染色时间或染色后放置时间对精子DFI结果没有显著影响。精子DFI检测最好为新鲜精液样本,如需冷藏,不能超过1 d。直接冷冻精液样本可以作为精子DFI检测的室内质控品。冷冻保护剂能否使冷冻精液样本更为稳定、室间质控品如何制备和运输将是未来要解决的关键问题。

• 单位
  南京欣迪生物药业工程有限责任公司; 东南大学附属中大医院