基因甲基化聚合酶链反应检测体系的优化

作者：揣征然; 黄庆; 黄君富; 府伟灵

来源：检验医学与临床, 2014, 11(21): 2945-2949.

• 限制性内切酶缓冲液
• 聚合酶链反应缓冲液
• 纯化
• 基因甲基化检测

目的优化甲基化敏感限制性内切酶的聚合酶链反应(PCR)检测体系。方法用甲基化敏感限制性内切酶-PCR技术对10例健康未孕女性的RASSF1A基因进行甲基化检测,并对反应的缓冲体系进行优化。结果未经纯化的酶切产物直接进行PCR时,PCR反应特异性降低,出现众多非特异PCR产物;纯化酶切产物或用PCR缓冲液替代酶切缓冲液后,PCR反应特异性变高。结论酶切缓冲液可影响后续PCR反应的特异性,采取纯化措施或以PCR缓冲液替代酶切缓冲液能够有效提高后续PCR特异性,首选PCR缓冲液替代更为简便。

• 单位
  第三军医大学西南医院