科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的研究艾拉莫德是否能够抑制TGF-β1诱导的人肺成纤维细胞(HLFs)活化及胶原分泌。方法在体内, 建立小鼠肺纤维化模型, 分为3组:正常对照组、博莱霉素组和博莱霉素+艾拉莫德组, 苏木精-伊红(HE)染色观察肺形态, 马松染色观察肺内胶原积累程度, 组织免疫荧光检测肺内肌成纤维细胞标志蛋白纤维连接蛋白(fibronectin)和平滑肌22蛋白(SM22), 氯胺-T法检测肺组织羟脯氨酸含量。在体外, 用原代人肺成纤维细胞(pHLFs)进行细胞实验评估艾拉莫德对TGF-β1刺激的影响, 分为4组:正常对照组、艾拉莫德组、TGF-β1组、TGF-β1+艾拉莫德组, 流式细胞术检测细胞的凋亡情况, 实时荧光定量(qRT)-PCR检测细胞Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的mRNA表达水平, 蛋白质印迹法和细胞免疫荧光检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、fibronectin、p-Smad2和p-Smad3以及转录辅助激活因子p300的蛋白水平。数据均采用单因素方差分析, 两两比较用LSD-t检验或Kruskal-Wallis检验。结果羟脯氨酸含量:正常对照组为(0.552±0.075)μg/mg, 博莱霉素组为(1.293±0.081)μg/mg, 博莱霉素+艾拉莫德组(0.833±0.053)μg/mg (F=169.672, P<0.01), 艾拉莫德降低了小鼠肺组织羟脯氨酸含量, 减少了肺内胶原积累, 从而降低了博莱霉素诱导的肺纤维化程度, 改善了小鼠肺部病理改变。在细胞实验中, 艾拉莫德对细胞凋亡比例差异无统计学意义(F=0.83, P=0.54);Ⅰ型胶原蛋白mRNA相对表达量:正常对照组为(100.4±1.2), TGF-β1组为(299.0±13.0), TGF-β1+艾拉莫德组(202.5±7.0)(F=468.7, P<0.01);Ⅲ型胶原蛋白mRNA相对表达量:正常对照组为(99.8±1.9), TGF-β1组为(350.6±8.0), TGF-β1+艾拉莫德组(220.3±9.9)(F=468.7, P<0.01);α-SMA蛋白相对表达量:正常对照组为(0.193±0.038), TGF-β1组为(0.530±0.061), TGF-β1+艾拉莫德组为(0.410±0.065)(F=35.620, P<0.01);Fibronectin蛋白相对表达量:正常对照组为(0.200±0.020), TGF-β1组为(0.700±0.020), TGF-β1+艾拉莫德组为(0.410±0.066)(F=123.326, P<0.01);p-Smad3蛋白相对表达量:正常对照组为(0.120±0.020), TGF-β1组为(0.573±0.586), TGF-β1+艾拉莫德组为(0.327±0.252)(F=92.987, P<0.01);p300蛋白相对表达量:正常对照组为(0.180±0.055), TGF-β1组为(0.923±0.025), TGF-β1+艾拉莫德组(0.650±0.050)(F=207.676, P<0.01)。艾拉莫德显著降低TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的mRNA表达水平, 抑制α-SMA、Fibronectin、p300蛋白表达, 以及Smad2、Smad3蛋白的磷酸化。结论艾拉莫德能够经Smad3/p300通路抑制TGF-β1介导的人肺成纤维细胞活化及胶原分泌, 它可能作为一种有效的抗纤维化药物用于延缓PF的进展。
- 单位
