insig-1基因siRNA干扰质粒的构建及对炎症状态下细胞胆固醇代谢的影响

作者：柯大智; 陈庆伟; 李桂琼; 邓玮; 莫显刚

来源：第三军医大学学报, 2011, (14): 1471-1475.

DOI：10.16016/j.1000-5404.2011.14.009

• insig-1基因
• RNA干扰
• siRNA质粒载体
• 巨噬细胞RAW264.7 insig-1
• RNAi
• siRNA plasmid
• RAW264.7

目的构建针对insig-1基因的siRNA表达载体,观察其对炎症状态下RAW264.7小鼠巨噬细胞胆固醇代谢的影响。方法根据insig-1核苷酸序列,设计并构建针对insig-1基因mRNA的3个特异性siRNA表达载体(si-1、si-2、si-3)和1个无同源性的阴性对照载体(si-nc),经酶切和测序鉴定确认siRNA载体构建成功后,转染RAW264.7小鼠巨噬细胞,RT-PCR、免疫组化法检测insig-1基因的表达,筛选出最佳抑制基因后,应用酶学方法和油红O染色观察炎症处理后RAW264.7细胞内胆固醇含量的变化。结果经酶切证实,siRNA表达载体构建成功,RT-PCR、Wester...

• 单位
  重庆医科大学附属第二医院