ANG-1基因重组腺相关病毒获取及转染猪骨髓干细胞的研究

作者：朱成楚; 陈仕林; 刘玉清; 唐礼江; 包卫光

来源：浙江大学学报(医学版), 2009, (04): 370-376.

• 血管生成素1/代谢
• 腺病毒科/遗传学
• 骨髓祖代细胞/代谢
• 重组
• 遗传
• 转染
• 腺相关病毒载体
• 骨髓干细胞 Angiopoietin-1/metab
• Adenoviridae/genet
• Myeloid progenitor cells/metab
• Recombination
• genetic
• Transfection
• rAAV
• Mesenchymal stem cells

目的:构建携带血管形成素-1(ANG-1)基因腺相关病毒(AAV)载体,通过病毒包装和纯化及滴定,获得高纯度高感染性的病毒液,并转染到乳猪骨髓干细胞中,获得有效表达,为进行血管再生的基因治疗研究奠定基础。方法:利用PCR技术,获取目的基因ANG-1,通过重组DNA技术得到ANG-1与pUC119的重组质粒,采用Sal和Bgl双酶将pUC119中的目的基因ANG-1基因片断切出,再克隆到质粒pSNAV2.0中。用Lipofectamine将pSNAV ANG-1质粒转染293细胞后,用G418选择培养获得293/AAV2ANG-1细胞株,产生了有传染性的病毒颗粒,纯化并进行病毒DNA颗粒滴度测定...

• 单位
  中国医学科学院阜外医院; 江苏省肿瘤医院; 浙江省台州医院