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摘要
建立基于RPA/CRISPR-Cas12a技术单核细胞增生李斯特菌的快速检测方法。选取单增李斯特菌溶菌素毒力基因hly(GeneID:987033)，设计重组酶聚合酶扩增（recombinase polymerase amplification,RPA）引物结合CRISPR-Cas12a蛋白研制两步法单增李斯特菌快速检测试剂盒，并对其灵敏度、特异性以及反应速率进行分析。结果表明：该法检测速率快，30 min内可检出单核细胞增生李斯特菌，同时具有较高的灵敏度，20μL体系可检测到最低0.0015 ng靶标核酸。将该试剂盒进一步用于检测人工模拟污染食品三文鱼肉片，检测限可达10 CFU/mL。本方法检测30份实际样本，结果均与荧光定量聚合酶链式反应法阳性检出率一致。RPA/CRISPR-Cas12a技术是快速检测食源性单增李斯特菌的可行方法。
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单位淮安市疾病预防控制中心
