直流生物电刺激活化PTEN/Akt/mTOR信号通路促进人口腔黏膜成纤维细胞增殖的研究

作者：孙兆琦; 张陈平^*; 曲行舟

来源：口腔颌面外科杂志, 2022, 32(06): 336-342.

DOI：10.3969/j.issn.1005-4979.2022.06.002

• 直流电刺激
• 人口腔黏膜成纤维细胞
• PTEN/Akt/mTOR信号通路

目的 ：探讨直流电刺激（direct current stimulation,DCS）对人口腔黏膜成纤维细胞（human oral mucosa fibroblast,hOMF）增殖的影响及相关机制。方法：以不同强度（0、10、25、50、100μA）、时长（0、5、10、30、60 min）、频率（0、1、2、3次/d）的DCS作用于hOMF，应用CCK-8法检测细胞增殖情况。通过酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测DCS组与对照组（接种的细胞贴壁后，随机设置DCS组及对照组）24、48 h细胞培养上清液中表皮细胞生长因子（epidermal growth factor,EGF）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的浓度。通过蛋白质印迹法（Western blotting）检测经DCS后的hOMF中蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)及磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian rapamycin target protein,mTOR）及磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（phosphorylated mammalian rapamycin target protein,p-mTOR）、磷酸酶和张力蛋白同源物（phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN）的表达水平。结果：通过检测DCS强度梯度、时间梯度、频率梯度的吸光度值可知，25μA的电流强度（P<0.01）、10 min的刺激时长（P<0.001）及2次/d的刺激频率（P<0.01）为hOMF的显著增殖刺激条件。相较于对照组，DCS组24 h和48 h细胞培养上清液中VEGF的浓度均有所升高，24 h培养上清液中的VEGF浓度升高更为明显（P<0.01）。在不同时长的DCS下，刺激5、10 min后的p-mTOR和p-Akt的蛋白表达升高（P<0.05）,PTEN的蛋白表达降低（P<0.001）。结论：DCS可促进hOMF的增殖，诱导细胞因子VEGF的高表达，可能与PTEN/Akt/mTOR信号通路的激活有关。

• 单位
  上海市第八人民医院; 上海交通大学医学院附属第九人民医院; 上海市口腔医学研究所