CRISPR/Cas9敲除HBV pre S1段对肝癌细胞中HBV病毒复制的影响

作者：龙黎; 罗新华; 张茜^*

来源：贵州医科大学学报, 2022, 47(10): 1163-1188.

DOI：10.19367/j.cnki.2096-8388.2022.10.006

• 乙型肝炎病毒
• 抗病毒治疗
• CRISPER/Cas9
• 病毒复制
• 临床治愈
• 基因编辑

目的 探讨CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除HBV pre S1段对肝癌细胞中HBV病毒复制的影响，分析基因编辑联合传统抗病毒药物或免疫调节剂的抗病毒疗效。方法 根据HBV pre S1段设计特异性干扰片段g RNA(sg RNA-1、sg RNA-2及sg RNA-3)接入表达载体进行转化，经DAPI染色鉴定转染、获得HBV pre S1敲除的Hep AD38细胞;采用马酸替诺福韦(TDF)和干扰素-α(IFN-α)处理HBV pre S1敲除的Hep AD38细胞，取上清液、采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测HBs Ag、HBcr Ag的含量，RT-PCR方法检测HBV DNA、pg RNA水平。结果 成功构建HBV g RNA,sg RNA-3作用最强;成功获得HBV pre S1敲除的Hep AD38细胞，Cas9/sg RNA定位于细胞核;与对照组细胞比较，HBV pre S1敲除的Hep AD38细胞HBV复制水平降低(P <0.05),TDF或IFN-α处理HBV pre S1敲除的Hep AD38细胞能有效增强抗病毒效应(P <0.05)，且IFN-α处理的细胞更能抑制HBV RNA和HBs Ag的分泌。结论 Cas9/sg RNA靶向HBV DNA切割能抑制HBV病毒的复制，传统抗病毒药物或免疫调节剂能使该作用增强。

• 单位
  贵州省人民医院