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摘要
目的:检测人子宫内膜癌Ishikawa细胞转染pc DNA3.1-ELF5+EGFP后ELF5基因的表达,并观察其对Ishikawa细胞凋亡情况及周期变化的影响。方法:通过脂质体介导的方法将pc DNA3.1-ELF5+EGFP真核细胞表达载体体外转染至子宫内膜癌Ishikawa细胞,设立实验组(转染pc DNA3.1-ELF5+EGFP真核载体)、空质粒组(转染pc DNA3.1-EGFP空载体)、空白对照组(未经转染的Ishikawa细胞)。体外实验:用qRT-PCR法检测子宫内膜癌Ishikawa细胞中ELF5mRNA的表达情况,MTT法检测ELF5mRNA对Ishikawa细胞增殖的影响,流式细胞仪检测三组细胞周期及凋亡情况,Western blot法检测三组肿瘤组织的细胞周期调控蛋白P21及凋亡调控因子Caspase-3表达情况的变化。体内实验:将三组细胞分别接种于NOD/SCID雌性裸鼠,观察肿瘤生长情况及测定成瘤能力,应用TUNEL法检测三组肿瘤组织细胞凋亡的情况,采用蛋白印迹法检测三组肿瘤组织的细胞周期调控蛋白P21及凋亡调控因子Caspase-3表达情况的变化。结果:重组质粒pc DNA3.1-ELF5+EGFP成功转染至子宫内膜癌Ishikawa细胞;重组质粒组细胞ELF5mRNA的表达明显高于空质粒组及空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);重组质粒组各时间点的细胞增殖能力较较其他两组明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);重组质粒组G0/G1期的细胞比例均高于空质粒组及空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);重组质粒组细胞凋亡率分别与空质粒组及空白对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);重组质粒组细胞中P21及Caspase-3的表达明显高于空质粒组及空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。重组质粒组裸鼠体内的成瘤能力(瘤组织最大直径、重量)明显低于空质粒组及空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);重组质粒组裸鼠体内瘤组织细胞凋亡率分别与空质粒组及空白对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);(9)重组质粒组裸鼠体内瘤组织P21及Caspase-3的表达明显高于空质粒组及空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:ELF5基因可抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖,将细胞周期阻滞于G0/G1期,并诱导其凋亡,其机制可能与P21及Caspase-3有关。
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单位徐州市第一人民医院; 徐州医科大学
