含O型FMDVP1-2A、3CC基因和EGFP基因表达盒的构建

作者：王建科; 吴国华; 叶奕优; 颜新敏; 朱海霞; 李健; 朱彩珠; 张强; 王雯慧

来源：甘肃农业大学学报, 2009, (1): 15-20.

DOI：10.3969/j.issn.1003-4315.2009.01.004

• FMDV
• 启动子P7.5j
• P1-2A基因
• 3C基因

采用RT-PCR方法分别扩增口蹄疫病毒O/China99毒株的P1-2A和3C基因,将P1-2A基因连接到pUC119载体,3C基因连接到pMDI8-T载体,分别得到重组载体pUCll9-P1-2A和pMDI8-T-3C;将重组载体pUCll9-P1-2A用HindⅢ、BamH I酶切,重组载体pMDI8-T-3C用BamH I、Nhe I酶切;利用酶切所得到的基因片段P1-2A、3C有共同的BamH I酶切位点,实现基因P1-2A、3C的连接,构建重组载体pMDI8-T-P1-2A-3C.,将基因P1-2A-3C与启动EGFP表达的双向串连痘苗病毒启动子P7.5相连,构建载体p-EGFP-N1-P7.5-P1-2A3C,并进行PCR扩增、酶切鉴定及序列测定.结果表明:试验成功构建了一侧启动表达P1-2A-3C基因,一侧启动表达标记基因EGFP的表达盒p-EGFP-N1-P7.5-P1-2A-3C.

• 单位
  深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心; 农业部; 甘肃农业大学; 中国农业科学院兰州兽医研究所