非洲猪瘟病毒p54蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

作者：赵改红; 张涛清; 向志达; 张元峰; 李江南; 翁长江^*

来源：中国动物传染病学报, 2023, 31(01): 166-173.

DOI：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.2023.01.018

• 非洲猪瘟病毒
• p54蛋白
• 多克隆抗体

本研究以ASFV Pig/HLJ/18分离株基因组DNA为模板扩增tE183L基因片段，构建重组原核表达质粒pET-21a-tE183L。将其转化BL21(DE3)感受态细胞后经IPTG诱导表达可溶性p54蛋白，并将采用镍亲和层析柱和分子筛纯化的p54与弗氏佐剂等比混合后免疫新西兰大白兔，采集血清经Protein G亲和层析纯化得到兔抗p54多克隆抗体。研究结果表明，构建的原核表达质粒p ET-21a-t E183L可成功表达p54蛋白且纯度较高。Western blot、间接免疫荧光和免疫沉淀试验结果显示，纯化的抗p54多克隆抗体能特异性识别HEK293T细胞中瞬时表达的Flag-ASFV p54蛋白和ASFV感染肺泡巨噬细胞（PAMs）后表达的ASFV p54蛋白。本研究成功表达和纯化p54可溶性蛋白；制备的多克隆抗体有良好的特异性，这为深入探讨ASFV p54蛋白的生物学功能奠定了基础。

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 动物科学学院; 长江大学