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摘要
目的:构建沉默的人Set7/9的真核表达载体,筛选其稳定转染的骨肉瘤Saos-2细胞株,评价干扰效果以及对骨肉瘤相关基因表达和细胞增殖的影响,为临床骨肉瘤基因治疗提供新靶点。方法:依据靶向序列,构建人Set7/9基因的sh RNA和对照载体,稳定转染骨肉瘤细胞Saos-2。应用Real-time PCR以及Western-blot方法检测其基因和蛋白质水平,确定该基因的沉默情况。结果:构建载体Set7/9-sh RNA,Real-time PCR和Western-blot结果显示,沉默后Set7/9基因和蛋白表达明显被抑制,而与其相关的Sirt1、Suv39h1蛋白表达水平提高,细胞增殖率增加。结论:沉默Set7/9基因后,上调与其相关的Sirt1和Suv39h1蛋白表达水平,Set7/9基因在骨肉瘤Saos-2细胞系中可能调控其的表达。此外,细胞增殖效率增加表明Set7/9具有抑制骨肉瘤Saos-2细胞增殖的作用。
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