蓝舌病病毒8型VP2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定

作者：席娜; 赵国辉; 孙恩成; 秦永丽; 孙亮; 魏天; 徐青元; 杨涛; 孙晶; 刘二战; 钱爱东; 吴东来

来源：中国预防兽医学报, 2014, 36(04): 318-322.

• 蓝舌病病毒8型
• VP2蛋白
• 真核表达
• 单克隆抗体
• 抗原表位

为制备蓝舌病病毒(BTV)8型VP2蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究采用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达并纯化的重组VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,三免后取小鼠脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,并以纯化的重组VP2蛋白为包被抗原,通过间接ELISA筛选出两株能够稳定分泌抗BTV8VP2蛋白的MAbs杂交瘤细胞株(2G4和3B7)。间接免疫荧光结果表明:2G4和3B7与BTV8均呈阳性反应,与BTV17、BTV924、茨城病毒、中山病毒以及赤羽病毒均呈阴性反应。Western blot结果显示,2G4和3B7均能够识别BTV8及BTV8重组VP2蛋白。Ig亚类鉴定2G4和3B7均为IgG1/κ链。利用原核表达的96条覆盖VP2全长的麦芽糖结合蛋白(MBP)融合短肽对MAbs的抗原表位进行鉴定,结果表明:MAb 2G4识别的抗原表位为281LCRLLSTIGRKMCNTE296。本研究结果为BTV8型特异性检测方法的建立及VP2蛋白结构和功能的研究奠定了基础。

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室; 农业部; 吉林农业大学