结核分枝杆菌H37Rv色氨酸合成酶α亚基编码基因的克隆、表达及酶学性质分析

作者：赵静静; 徐胜凤; 王虹军; 沈洪波; 王洪海

来源：微生物与感染, 2008, (04): 195-199.

• 结核分枝杆菌
• 色氨酸合成酶
• α亚基
• 同源模建 Mycobacterium tuberculosis
• Tryptophan synthase
• α subunit
• Homologous modeling

目的克隆表达色氨酸合成酶α亚基编码基因并对其进行功能分析。方法以结核分枝杆菌(简称结核杆菌)H37Rv基因组为模板,扩增trpA基因,构建pET30a-trpA重组质粒;转化重组质粒到大肠埃希菌DH5α并在BL21(DE3)诱导表达,纯化可溶性的结核杆菌重组色氨酸合成酶α亚基(His-rMtTrpA)。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和质谱分析测定相对分子质量(Mr)后,用圆二色光谱(CD)分析和同源模建方法检测二级和三级结构。研究不同浓度His-rMtTrpA对β亚基酶活反应的影响。结果成功克隆了813bp的目的基因trpA,并获得了高纯度的His-rMtTrpA蛋白。...