PEDV S基因的B细胞表位嵌入型乳杆菌S-层蛋白的原核表达及其鉴定

作者：朝木丽格; 侯殿文; 韩佳; 黄天鹏; 吴咪; 贺海燕; 格日勒图^*

来源：中国兽医学报, 2019, 39(11): 2118-2122.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.11.04

• 猪流行性腹泻病毒
• S基因
• 嗜酸性乳杆菌
• S层蛋白
• B细胞表位
• 原核表达

利用生物软件和在线数据库中筛选出猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV) S基因的B细胞表位,通过overlap PCR方法将其嵌入到嗜酸性乳杆菌的S-层蛋白基因中,获得融合基因SLP-EpitopeS。将该融合基因导入到原核表达载体pGEX-4T-3中,成功构建了原核表达载体pGEX-SLP-EpitopeS。经过双酶切和PCR方法以及基因测序方法验证融合表达载体pGEX-SLP-EpitopeS的正确性。应用SDS-PAGE和Western blot方法鉴定表达产物,其中SDS-PAGE结果显示:融合蛋白质的大小约为77 000,与理论值相符;Western blot结果显示:融合蛋白SLP-EpitopeS被GST血清所识别,而B细胞表位分别被表位特异的鼠源单克隆抗体(McAb)和表位合成多肽所识别。本试验为进一步嵌入型蛋白SLP-EpitopeS的免疫原性研究奠定了基础。

• 单位
  内蒙古农业大学