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摘要
目的优化和建立PCR-高分辨率熔解曲线(HRM)的方法 ,分析幽门螺杆菌左氧氟沙星耐药基因gyrA基因突变,为临床选择个体化的幽门螺杆菌根除方案提供帮助。方法收集2013年5月至2013年10月南通大学附属东台医院消化内科进行胃内窥镜检查的45例消化性溃疡患者的胃黏膜组织,微需氧条件(5%O2、10%CO2、85%N2)下培养出23株幽门螺杆菌临床分离菌株,采用E-test法进行左氧氟沙星药敏试验。提取患者胃黏膜组织和临床分离菌株DNA, PCR扩增gyrA基因部分片段后进行序列分析,采用PCR-HRM分析gyrA基因突变。结果左氧氟沙星的耐药率为47.8%(11/23)。11株耐药菌株中10株菌株gyrA基因发生突变,突变形式主要为C261A、G271T、A272G+G514A。9.1%(1/11)耐药菌株和所有敏感菌株gyrA基因均未发生突变。PCR-HRM方法的特异度和重复性均为100%,最低检测限为102 copies/μl。结论 PCR-HRM方法能准确、快速检测幽门螺杆菌gyrA基因突变。
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