核定位信号肽偶联核激酶底物短肽修饰壳聚糖介导微小RNA-140对兔关节软骨细胞作用的研究

作者：张洋洋; 彭效祥; 宋伟; 孙艳丽; 王鲁娟; 李倩; 赵荣兰

来源：中国修复重建外科杂志, 2017, 31(10): 1256-1261.

• 微小RNA-140
• 壳聚糖
• 软骨细胞
• 信号肽
• 兔

目的探讨核定位信号肽偶联核激酶底物短肽(nucleus localization signal linked nucleic kinase substrate short peptide,NNS)修饰壳聚糖(chitosan,CS)(NNSCS),介导人微小RNA-140(micro RNA-140,miR-140)基因转染,对体外培养的兔关节软骨细胞的作用。方法将重组质粒GV268-miR-140和空质粒GV268分别与NNSCS复合形成NNSCS/pDNA纳米复合物。取新生新西兰大耳白兔膝关节软骨,采用胰蛋白酶和胶原酶联合消化法分离培养原代软骨细胞。取第2代软骨细胞分为3组:正常细胞对照组(A组)、NNSCS/GV268空质粒转染组(B组)、NNSCS/GV268-miR-140转染组(C组),B、C组细胞分别以NNSCS/GV268及NNSCS/GV268-miR-140纳米复合物瞬时转染。转染后,实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,RT-qPCR)检测外源mi R-140的表达;AnnexinⅤ-FITC/PI双染色法及MTT法分别检测外源miR-140对软骨细胞凋亡及增殖活力的影响;RT-qPCR检测软骨细胞中Sox9、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、组蛋白去乙酰化酶4(histone deacetylase 4,Hdac4)基因表达。结果 RT-qPCR检测示,C组外源miR-140表达水平较A、B组明显上调(P<0.05)。与A、B组比较,C组软骨细胞凋亡率明显降低,细胞增殖活力明显增加,细胞内Sox9、Aggrecan基因相对表达量明显上调、Hdac4基因相对表达量明显下调(P<0.05);A、B组间以上指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 NNSCS可携带外源基因进入软骨细胞并高效表达,高表达的miR-140能提高体外培养软骨细胞的生物活性,为其用于治疗软骨损伤性疾病提供了实验依据。

• 单位
  潍坊医学院附属医院; 潍坊医学院