结核分枝杆菌和卡介苗菌株中喹啉酸磷酸核糖转移酶(QPRT)的原核表达及酶活性测定

作者：葛赛; 孙曼銮^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2023, (21): 31-36.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2022.09.0210

• 结核分枝杆菌
• 卡介苗
• 喹啉酸磷酸核糖转移酶
• 蛋白表达
• 酶活性测定

为了在原核表达系统E.coli中表达并纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tuberculosis)H37Ra和卡介苗菌株(Mycobacterium bovis bacilli-Calmette-Guerin, BCG)str.Pasteur 1173P2的喹啉酸磷酸核糖转移酶(quinolinic acid phosphoribosyl transferase, QPRT),探索不同来源QPRT蛋白结构，并测定其酶活性，试验采用PCR方法分别对M.tuberculosis和BCG中QPRT的编码基因nadC进行扩增，与pET-28a载体连接构建重组载体并在E.coli中完成原核蛋白的表达，在体外进行目的蛋白的纯化，利用高效液相色谱法检测不同来源的QPRT蛋白酶活性，使用PyMOL v2.3.2软件分析其氨基酸残基结构。结果表明：在体外成功克隆了M.tuberculosis和BCG中的大小为858 bp的编码基因nadC,并成功构建出重组载体pET-28a-nadC-MTB和pET-28a-nadC-BCG,在E.coli中进行QPRT蛋白的表达与体外纯化后获得分子量为34 ku的QPRT蛋白；两种不同菌株来源的QPRT蛋白以喹啉酸(quinolinic acid, QA)为底物时酶活性无差异；不同来源的QPRT蛋白中存在1个差异氨基酸残基位点，但酶活性并无明显差异。说明QA的结构类似物吡嗪酸(pyrazinoic acid, POA)不是QPRT的底物，为抗结核药物靶点的探索提供了潜在价值。

• 单位
  山西大同大学