茉莉花JsMYB305转录因子的原核表达及蛋白纯化

作者：万超; 张月; 胡莉; 伍炳华; 袁媛^*

来源：福建农业学报, 2022, 37(02): 164-169.

DOI：10.19303/j.issn.1008-0384.2022.002.005

• 茉莉花
• MYB转录因子
• 原核表达
• 蛋白纯化

【目的】获得茉莉花香气调控转录因子JsMYB305的重组蛋白，为深入研究JsMYB305调控茉莉萜类香气代谢的分子机理及筛选其他互作蛋白提供基础。【方法】通过酶切连接的方式，将JsMYB305的编码序列构建到原核表达载体pGEX-4T-1，转化BL21(DE3)表达菌株，通过IPTG诱导蛋白表达、 GST亲和树脂分离纯化，最后Western Blot鉴定重组蛋白。【结果】重组蛋白的诱导条件为0.2 mmol·L-1 IPTG，最适宜纯化的温度和时间为28℃诱导4 h，经20 mmol·L-1 GSH洗脱的蛋白纯度较好，Western Blot结果表明重组蛋白的大小正确。【结论】成功获得了JsMYB305重组蛋白，为后期利用GST-pull down技术筛选互作蛋白及EMSA研究JsMYB305对特定启动子位点的结合提供基础。

• 单位
  福建农林大学