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摘要
为了建立非洲猪瘟病毒(ASFV)重组酶辅助扩增(RAA)与核酸检测试纸条相结合的可视化RAA检测方法，本试验根据ASFV的B646L基因(编码p72蛋白)保守区设计特异性的引物和探针，通过优化引物和探针浓度、反应温度和反应时间，确定反应的最佳体系和扩增条件；检测建立的可视化RAA方法的特异性和灵敏性，分析建立方法与非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒对临床样品检测结果的符合率。结果显示，建立的可视化RAA方法的反应体系为25μL,在38℃恒温条件下反应20 min即可在5 min内读取结果；与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)等均不发生交叉反应；单个反应可检测到48.75拷贝的病毒核酸。初步临床应用结果显示，建立的可视化RAA方法与商品化的非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒检测结果一致，其阴性和阳性符合率均为100%。本试验成功建立的基于ASFV B646L基因的可视化恒温扩增方法具有反应时间短、特异性和灵敏度高、操作便捷等优势，适合现场快速检测和诊断，具有进一步开发潜力。
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