FGD5-AS1调控miR-133a-3p对脓毒症血管内皮细胞的细胞活性、凋亡及炎症因子表达的影响

作者：杨燕; 刘德智^*

来源：中国免疫学杂志, 2021, 37(17): 2076-2081.

• LncRNA FGD5-AS1
• miR-133a-3p
• 脓毒症
• 血管内皮细胞
• 凋亡
• 炎症因子

目的:探讨长链非编码RNA FGD5-AS1(LncRNA FGD5-AS1)对脓毒症血管内皮细胞增殖、凋亡及炎症因子表达的影响及其分子机制。方法:原代培养大鼠血管内皮细胞,10 mg/ml LPS处理细胞24 h构建脓毒症模型。采用qRT-PCR检测FGD5-AS1与微小RNA-133a-3p(miR-133a-3p)的表达水平。分别将pcDNA3.1、pcDNA3.1-FGD5-AS、pcDNA3.1-FGD5-AS1与miR-NC、pcDNA3.1-FGD5-AS1与miR-133a-3p转染至血管内皮细胞。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测TNF-α、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)水平;双荧光素酶报告实验验证FGD5-AS1与miR-133a-3p的相互作用;Western blot检测P21、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)蛋白表达量。结果:与control组相比,LPS组血管内皮细胞中FGD5-AS1的表达水平显著降低(P<0.05),细胞存活率显著降低(P<0.05),miR-133a-3p的表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),P21、Caspase-3蛋白水平显著升高(P<0.05),TNF-α、IL-1、IL-6水平显著升高(P<0.05);与LPS+pcDNA3.1组相比,LPS+pcDNA3.1-FGD5-AS组血管内皮细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),P21、Caspase-3蛋白水平显著降低(P<0.05),TNF-α、IL-1、IL-6水平显著降低(P<0.05);miR-133a-3p过表达可抑制野生型质粒WT-FGD5-AS1细胞的荧光素酶活性,且FGD5-AS1可负向调控miR-133a-3p的表达(P<0.05);miR-133a-3p过表达可逆转FGD5-AS1过表达对LPS诱导的血管内皮细胞增殖、凋亡及炎症因子表达的影响。结论:LncRNA FGD5-AS1靶向调控miR-133a-3p抑制LPS诱导的血管内皮细胞凋亡及炎症反应,促进细胞存活。

• 单位
  新乡医学院; 新乡市中心医院