下调孕烷X受体表达对谷氨酸诱导的小鼠脑微血管内皮细胞P-糖蛋白表达和功能的影响

作者：程永菲; 余年; 狄晴^*

来源：临床神经病学杂志, 2018, 31(06): 450-455.

• 孕烷X受体
• P-糖蛋白
• 谷氨酸
• 脑微血管内皮细胞
• 耐药性癫痫

目的探索下调孕烷X受体(PXR)表达对谷氨酸(GLU)模拟癫痫发作环境下小鼠脑微血管内皮细胞(m BMEC) P-糖蛋白(P-gp)表达和功能的影响。方法体外培养小鼠脑微血管内皮b End. 3细胞,分为不同浓度GLU处理组(以0μmol/L、10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L GLU处理细胞30 min),GLU不同时间处理组(以100μmol/L GLU处理细胞0 min、15 min、30 min);使用siRNA-PXR特异性抑制PXR表达,分为对照siRNA(NC siRNA)+GLU组、siRNA-PXR+GLU组。Western blotting检测细胞PXR和P-gp蛋白表达,细胞免疫荧光法检测细胞核内PXR蛋白表达,RT-qPCR检测细胞P-gp mRNA表达,罗丹明123(Rh123)细胞蓄积实验检测P-gp外排功能。结果与空白组相比,50μmol/L和100μmol/L GLU组PXR和P-gp蛋白表达均增高(均P <0. 05),尤以100μmol/L组PXR和P-gp蛋白表达最明显。与空白组相比,15 min和30 min组PXR蛋白表达均增加(均P <0. 05),30 min组P-gp蛋白表达增加(P <0. 05)。与空白组相比,100μmol/L GLU组胞核内PXR表达增加(P <0. 05)。与NC siRNA+GLU组相比,siRNA-PXR+GLU组PXR蛋白表达下调了37%[(1. 00±0. 00) vs (0. 63±0. 18); t=3. 41,P=0. 02],P-gp蛋白表达下调了43%[(1. 00±0. 00) vs(0. 57±0. 09); t=7. 94,P=0. 00],P-gp mRNA表达下调了52%[(1. 00±0. 04) vs (0. 48±0. 08); t=10. 98,P=0. 00]。GLU组细胞内Rh123荧光强度(0. 72±0. 01)较空白组降低[(1. 00±0. 03); t=9. 66,P=0. 00];GLU+维拉帕米(P-gp抑制剂)组(1. 07±0. 04)较GLU组增高(t=-11. 93,P=0. 00); siRNA-PXR+GLU组(0. 91±0. 03)较NC siRNA+GLU组增高[(0. 69±0. 05); t=-7. 52,P=0. 00]。结论下调PXR表达能够抑制m BMEC在GLU模拟癫痫发作环境下的P-gp表达及其功能,提示PXR参与调控癫痫发作诱导血-脑屏障P-gp表达及其功能。

• 单位
  神经内科; 南京医科大学