猪流行性腹泻病毒纳米抗体酵母表达载体的构建及其表达分析

作者：王小奎; 郭涛; 李村院; 李晓悦; 胡瑞瑞; 李雅心; 张云峰; 倪伟^*; 胡圣伟^*

来源：生物技术, 2021, 31(01): 10-15.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2021.01.0002

• 猪流行性腹泻
• 毕赤酵母
• 纳米抗体
• 真核表达

[目的]探究猪流行性腹泻病毒纳米抗体SH-Fc蛋白在毕赤酵母中的分泌表达情况,以期获得毕赤酵母表达系统,从而进一步研究PEDV的治疗方法。[方法]利用相关生物学分析软件对目的蛋白进行理化性质,磷酸化位点及二、三级结构的分析。将p UC57-SH-Fc质粒与酵母表达载体p PIC9K双酶切,构建真核表达载体p PIC9K-SH-Fc,经SalⅠ酶线性化后电转入毕赤酵母GS115中,利用G418抗性筛选以及菌落PCR的方法鉴定阳性菌株,阳性菌株经过30℃、0.8%甲醇诱导72 h,用SDS-PAGE和Western Blotting鉴定诱导表达后的上清液中蛋白表达情况。[结果]成功构建了真核分泌表达载体p PIC9K-SH-Fc,成功在毕赤酵母中表达目的蛋白,表达产物分子量与理论值55.1k Da相符合。[结论]成功诱导SH-Fc蛋白的分泌表达,获得了分泌表达目的蛋白的毕赤酵母表达系统,为后续研究PEDV的防治提供参考和奠定基础。

• 单位
  生命科学学院; 石河子大学; 新疆农垦科学院