芹菜素对化学法氧糖剥夺/复氧复糖损伤大鼠心肌细胞保护作用研究

作者：禹博; 祁琳; 金鑫; 曹清文; 田晨; 李佳颖; 王越; 周建妹; 陈康寅^*

来源：天津医科大学学报, 2023, 29(03): 258-264.

• 芹菜素
• 氧糖剥夺/复氧复糖
• 氯化钴
• 心肌细胞

目的：研究芹菜素(API)对化学法氧糖剥夺/复氧复糖(OGD/R)大鼠H9c2心肌细胞损伤的保护作用及分子机制。方法：首先给予H9c2细胞不同浓度的氯化钴(CoCl2)或1%O2处理24 h，通过测定细胞活力和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达水平，确定模拟1%O2的等效Co Cl2浓度；然后给予H9c2细胞CoCl2或1%O2处理合并无糖培养16 h，再正常培养(复氧复糖)4 h，测定细胞活力和HIF-1α的表达水平，确定OGD/R模型等效CoCl2浓度。MTT法测定不同浓度API对OGD/R大鼠H9c2细胞活力的影响；ELISA法检测细胞Caspase-3含量；超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定细胞SOD和LDH含量；采用Western印迹方法检测细胞Bcl-2、Bax、SIRT1、p62和LC3Ⅱ/Ⅰ表达水平。结果：筛选1%O2的等效CoCl2浓度结果显示，与对照组相比，CoCl2(0.8 mmol/L)组细胞活力明显降低(P<0.05),HIF-1α表达明显上调(P<0.05)且与1%O2组无显著差异(P>0.05)，因此选取Co Cl2(0.8 mmol/L)用于OGD/R模型。与对照组相比，OGD/R组的细胞活力及SOD含量明显下降(P<0.05),LDH漏出量和Caspase-3含量明显提高(P<0.05),SIRT1、LC3Ⅱ/Ⅰ及Bcl-2表达量均明显下降(均P<0.05),Bax及p62的表达量明显增加(P<0.05)；与OGD/R组相比，API(0.01～10μmol/L)组细胞活力有显著提高(P<0.05);10μmmol/L API能显著提高细胞SOD含量(P<0.05)，显著降低LDH漏出量和Caspase-3含量(均P<0.05)，明显提高SIRT1、LC3Ⅱ/Ⅰ及Bcl-2的表达量(均P<0.05)，降低Bax及p62的表达量(均P<0.05)。结论：0.8 mmol/L CoCl2合并剥糖16 h后恢复4 h可构建稳定的H9c2细胞OGD/R损伤模型，API可通过调节SIRT1增强自噬以抵抗H9c2细胞OGD/R损伤和凋亡。

• 单位
  天津医科大学第二医院; 武警后勤学院; 天津中医药大学