汉逊酵母表达乙肝表面抗原的结构研究

作者：刘闯; 朱亭玉; 李津; 王钊; 马锐; 王曦; 尹长城

来源：中国医药生物技术, 2009, 4(06): 441-444.

DOI：10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2009.06.008

• 毕赤酵母
• 肝炎表面抗原,乙型
• 负染色
• 显微镜检查,电子,透射

目的解析汉逊酵母表达重组乙肝表面抗原(HBsAg)的空间结构,给出其颗粒大小、结构对称性方面的信息。方法整合adr亚型HBsAg的基因到汉逊酵母染色体上,建立重组汉逊酵母菌。经过发酵扩菌、诱导表达、精制纯化等步骤得到纯化的HBsAg。滴加5μl浓度为80μg/mlHBsAg溶液到亲水处理的纯碳膜铜网上,用2%醋酸铀染色,放置24h后,通过透射电镜得到汉逊酵母表达HBsAg颗粒的二维电镜图像。运用EMAN软件包完成图像选择、颗粒框取、颗粒全同性处理、初始模型构建和结构精修等HBsAg重构步骤,获得HBsAg颗粒的三维结构。结果汉逊酵母表达HBsAg颗粒大小服从高斯分布(P=0.45),均值为(28.4±2.6)nm;汉逊酵母表达HBsAg是一中空的"鱼笼"状结构,蛋白亚基分布在球状结构的表面;蛋白的表面分布大小为1～2nm的孔状结构和围绕孔状结构的突起;不具备八面体对称性。结论汉逊酵母表达的HBsAg与血源性的HBsAg在大小和结构对称性方面都有显著差异。

• 单位
  北京大学; 北京天坛生物制品股份有限公司