人源大麻素Ⅰ型受体基因真核表达质粒的构建及表达

作者：郝坡; 马强; 孙厚良; 赖国旗; 李晶

来源：中国生物制品学杂志, 2016, 29(09): 918-921.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.001446

• 人源大麻素Ⅰ型受体
• 真核细胞
• 基因表达

目的构建人源大麻素Ⅰ型受体(human cannabinoid receptor 1,hCBⅠ)基因GV230真核表达质粒,并于HEK-293细胞中进行表达。方法以人脑皮质细胞的总RNA为模板,扩增获得hCBⅠ基因,克隆至真核表达载体GV230,构建重组表达质粒GV230-hCBⅠ,筛选阳性克隆,脂质体瞬时转染HEK293细胞。置倒置荧光显微镜下观察,并采用激光共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)和Western blot法检测hCBⅠ基因在HEK293细胞中的表达。结果重组表达质粒GV230-hCBⅠ经双酶切及测序鉴定,构建正确。转染48 h后,转染率约40%,CBⅠ蛋白主要于细胞膜分布及表达,且于相对分子质量约50 000处可见特异性条带。结论成功构建了重组真核表达质粒GV230-hCBⅠ,并于HEK293细胞中表达,为进一步研究CBⅠ的生物学功能奠定了基础。

• 单位
  重庆三峡中心医院; 重庆医科大学; 重庆三峡医药高等专科学校