膝痹宁通过CPT1调节滑膜氧化还原稳态缓解KOA疼痛的效应机制研究

作者：廖太阳; 张力; 丁亮; 李晓辰; 吴鹏; 梅伟; 张农山; 王培民; 张立

来源：解放军医学杂志, 2022, 1-13.

• 膝骨关节炎
• 肉毒碱棕榈酰转移酶
• 膝痹宁
• 背根神经节
• 疼痛

目的探讨膝痹宁通过肉毒碱棕榈酰转移酶（CPT1）调节滑膜氧化还原稳态缓解膝骨关节炎（KOA）疼痛的效应机制。方法提取大鼠膝关节成纤维样滑膜细胞（FLS），采用CCK-8法筛选膝痹宁冻干粉干预FLS细胞的合适作用浓度。将FLS细胞分为对照组、KOA组、膝痹宁组，采用5μg/ml脂多糖（LPS）诱导KOA炎症细胞模型，膝痹宁组加入100μg/ml膝痹宁，培养24h。采用Real-timePCR和Westernblotting检测肉毒碱棕榈酰转移酶（CPT1）、肉碱/有机阳离子转运体1（OCTN1）mRNA和蛋白的表达；试剂盒检测CPT1、超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量；使用2’，7’-二氯荧光素二乙酸酯检测活性氧（ROS）水平。提取大鼠背根神经节（DRG）神经元细胞，采用βⅢ-微管蛋白（βⅢ-tubulin）与胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫荧光染色进行鉴定。将收集的各组FLS上清加入DRG中干预24h，分别设为对照组、KOA组、膝痹宁组，采用Real-timePCR和Westernblotting检测DRG瞬时受体电位A1离子通道（TRPA1）mRNA和蛋白的表达；实时荧光钙成像观察DRG中TRPA1开放后Ca2+内流情况；ELISA法检测降钙素基因相关肽（CGRP）和P物质（SP）水平。结果选取膝痹宁冻干粉浓度100μg/ml进行实验。Real-timePCR和Westernblotting检测结果显示，膝痹宁组CPT1、OCTN1 mRNA和蛋白表达水平高于KOA组（P＜0.05）。与对照组比较，KOA组平均荧光强度[（26.46±2.07）AUvs.（5.52±0.78） AU]和MDA含量[（3.13±0.02）nmol/mlvs.（2.77±0.03）nmol/ml]明显升高（P＜0.05），CPT1[（4.98±0.02）nmol/minvs.11.50±0.21)nmol/min]、SOD[（11.38±0.05）U/mlvs.（17.6±0.07）U/ml]活性明显降低（P＜0.05）；与KOA组比较，膝痹宁组平均荧光强度[（14.07±1.41）AU]和MDA含量[（2.87±0.01）nmol/ml]明显降低（P＜0.05），CPT1[（7.94±0.21）nmol/min]、SOD活性[（13.81±0.07）U/ml]明显升高（P＜0.05）。与KOA组比较，膝痹宁组FLS上清干预可抑制DRG神经元细胞中TRPA1mRNA和蛋白的表达，以及TRPA1开放后Ca2+内流（P＜0.05），降低CGRP和SP表达量[（19.93±1.2）ng/Lvs.（30.19±1.58）ng/L，P＜0.05；（84.23±1.26）ng/Lvs.（123.16±2.95）ng/L，P＜0.05]。结论膝痹宁可能通过CPT1调控滑膜细胞氧化还原稳态而影响DRG细胞膜上TRPA1的Ca2+内流，减少疼痛因子的分泌，从而发挥减轻KOA疼痛的作用。

• 单位
  南京中医药大学; 江苏省中医院