解毒复正汤通过干扰miR-223-3p并靶向调控TGFBR3影响肺癌侵袭转移的实验研究

作者：姚菲; 石玮; 吕梦玉; 吴姗燕; 王家晓; 李春姗^*

来源：世界科学技术-中医药现代化, 2023, 25(04): 1358-1366.

• 微小核糖核酸-223-3p(miR-223-3p)
• 人转化生长因子β受体3(TGFBR3)
• 解毒复正汤
• 侵袭转移
• 肺癌

目的 探讨解毒复正汤（JieduFuzhengdecoction,JDFZ）通过影响微小核糖核酸-223-3p(Mircro ribonucleic acid-223-3p,miR-223-3p)靶向调控转化生长因子β受体3(Transforming growth factor β Receptor3,TGFBR3)的表达及其对肺癌细胞迁移的影响。方法 利用RT-qPCR技术检测肺腺癌患者癌组织及癌旁组织、肺腺癌患者及健康人外周血清中miR-223-3p表达水平的差异；并检测不同种类的NSCLC细胞系肺癌细胞（95D、LTEP-α-2、A549及NCI-H460）以及人肺上皮细胞BEAS-2B中miR-223-3p的本底表达量，从组织、血浆及细胞3个维度验证miR-223-3p的差异性。利用生物信息学网站重叠分析，初步预测到miR-223-3p与TGFBR33’UTR具有潜在的结合位点序列。接着运用双荧光素酶报告基因实验验证miR-223-3p与TGFBR3的靶向关系。体外培养肺癌A549细胞，采用脂质体法分别将miR-223-3p-过表达序列（miR-223-3p-mimics）及携带TGFBR3全基因的重组载体（Over-expression-TGFBR3,OE-TGFBR3）分别转染至肺癌细胞，以转入无关序列的模拟剂（Negative control-mimics,NC）作为对照组，收集各组稳转细胞，Transwell小室检测转染处理后及JDFZ作用后的细胞迁移能力；收集各组细胞蛋白，蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测细胞中EMT相关蛋白的表达。结果 肺癌组织中miR-223-3p的表达量显著低于癌旁组织；肺癌患者血浆miR-223-3p表达水平明显低于健康正常人。不同种类的NSCLC细胞系肺癌细胞（95D、LTEP-α-2、A549及NCI-H460）中的miR-223-3p表达量亦低于正常人肺上皮细胞BEAS-2B。利用生物信息学网站及荧光素酶报告基因实验证实了miR-223-3p与TGFBR3的靶向调控关系。与miR-223-3p NC组对比，miR-223-3p mimics组和miR-223-3p mimics+OE-TGFBR3组的细胞迁移能力均下降（P<0.05），上调TGFBR3和加入解毒复正汤均能有效增强miR-223-3p对A549细胞迁移的负向调节作用；Westenblot结果发现，与miR-223-3p NC组对比，miR-223-3p mimics组和miR-223-3p mimics+OE-TGFBR3组E-Cadherin的表达水平上调，NCadherin及Vimentin的表达水平下升（P<0.05），两组均在不同程度上抑制EMT的发生；上调TGFBR3和加入解毒复正汤作用能有效增加miR-223-3p对细胞迁移相关蛋白的负向调节作用（P<0.05）。结论 解毒复正汤对肺癌A549细胞的侵袭迁移有抑制作用，其机制可能是通过调节miR-223-3p并靶向调控TGFBR3及其下游EMT相关指标的表达来实现的。

• 单位
  广西中医药大学第一附属医院